Transzplantálható epitheliális monolayer előállíthatósága és jellemzése szaruhártya és kötőhártya eredetű ős-, ill. progenitor sejtekből

Nyomtatóbarát változatNyomtatóbarát változat
Konferencia: 
2010/2011. tanév
Tagozat: 
Operatív klinikai orvostudomány II.
Előadó szerző adatai
Név (format for foreign students: Last Name, First Name): 
Oravecz Rita

Előadás adatai

Előadás címe: 
Transzplantálható epitheliális monolayer előállíthatósága és jellemzése szaruhártya és kötőhártya eredetű ős-, ill. progenitor sejtekből
Összefoglaló: 

A cornea hámhiányait annak körkörös határán, a limbusban található őssejtek pótolják. Ha a regeneráció elmarad, az epitheliális réteg transzplantációval is pótolható. A közelmúltban történt egy sikeres vizsgálat, melynek során mind limbális, mind conjuctivális sejtekből monolayert növesztettek kontaktlencse felszínére, amelyet a szaruhártyára felhelyezve kialakult a jellemző epithel.
Célunk a módszer adaptálása, és a létrehozott monolayer sejtbiológiai jellemzése volt. Munkám során cornea transzplantációból megmaradt konzervált limbusból és műtét során eltávolított conjuctivából sztereomikroszkóp alatt 1 mm2 -es szeleteket készítettem, melyeket epitheliummal lefelé kontaktlencsére helyeztem, majd optimalizált, hidrokortizont, inzulint és EGF-et tartalmazó médiumban tenyésztettem. A 23 limbális minta nem mutatott sejtkiáramlást, ugyanakkor a conjunctiva esetén sikeres volt a tenyésztés. A sejteket tartalmazó kontaktlencsét fagyasztva metszettem, majd a mintákat indirekt immunfluoreszcenciával jelöltem. A jelöléshez különböző, az irodalomban elfogadott és a munkacsoport által azonosított őssejt, ill. progenitor sejt markereket (C/EBPδ, ABCG2, ΔNp63), szaruhártyára jellemző epitheliális markert (citokeratin 3), és mesenchymális markert (vimentin) használtam. Kontrollként HEK293 mesenchymális, HeLa és SKBR3 hámeredetű, valamint HCET immortalizált cornea epithel sejteket is vizsgáltam. A detektálás lézer pásztázó mikroszkóppal történt.
A kontaktlencsére tenyésztett sejtek többségének magjában a C/EBPδ jelölődött, ami a konfluenciáig nőtt monolayer mitotikus inaktivitásából, valamint progenitor jellegéből egyaránt eredhet. Az ABCG2, ΔNp63 és citokeratin3 jelölődés gyenge volt. A vimentin csak a sejtek egy részében, de erősen jelölődött. Ez korrelál a limbus fokozott vimentin expressziójával és felveti annak lehetőségét, hogy a kontaktlencsén mesenchymális, és/vagy erősen dedifferenciálódott sejtek is voltak.
Eredményeink alapján a konzervált cornea limbus nem alkalmas epitheliális monolayer előállítására kontaktlencsén, de friss conjuctivális hámból ős-, ill. progenitor sejteket tartalmazó réteg növeszthető. A továbbiakban ennek differenciálódását kívánjuk jellemezni.

1. témavezető adatai
Név: 
Takács Lili
Intézet / Tanszék/ Klinika: 
Szemklinika
2. témavezető adatai
Név: 
Vereb György
Intézet / Tanszék/ Klinika: 
Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet
Díj: 
1. díj

Támogatók: Támogatók: Az NTP-TDK-14-0007 számú, A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése helyi konferencia keretében, az NTP-TDK-14-0006 számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása, NTP-HHTDK-15-0011-es A Debreceni Egyetem ÁOK TDK tevékenység népszerűsítése 2016. évi helyi konferencia keretében, valamint a NTP-HHTDK-15-0057-es számú, A Debreceni Egyetem Népegészségügyi Karán folyó Tudományos Diákköri kutatások támogatása című pályázatokhoz kapcsolódóan az Emberi Erőforrás Támogatáskezelő, az Emberi Erőforrások Minisztériuma, az Oktatáskutató és Fejlesztő Intézet és a Nemzeti Tehetség Program